組織研磨機(jī)對擬南芥或水稻穗RNA的快速提取步驟

組織研磨機(jī)對擬南芥或水稻穗RNA的快速提取步驟

實(shí)驗(yàn)步驟

方法1  濕磨法

1.取打碎機(jī)適配器于-80°冷凍約15min。

2.取一指節(jié)長度的花序，帶上一片葉子，（材料量可多可少，7d大小的苗地上部分也能提出RNA），放入國產(chǎn)2ml EP管中，加一粒鋼珠，液氮速凍。之后用鑷子取出，快速加入適配器中。（用國產(chǎn)的EP管即可，進(jìn)口的管子液氮凍過后，容易裂）

3.打碎15s，10單位頻振。（水稻嫩葉為。45S，12單位頻振 老葉為，70S   12單位頻振 ）

4.將材料再次放入液氮中。

5.用磁鐵吸出鋼珠，加入1研磨單位Trizol，余下步驟即正常的RNA提取步驟。

方法2  干磨法

1.取一指節(jié)長度的花序（材料量可多可少，7d大小的苗地上部分也能提出RNA），放入國產(chǎn)2研磨單位EP管中，加一粒鋼珠，400ul Trizol。

2.打碎1min 10單位頻振（水稻嫩葉為。45S，2單位頻振   老葉為，70S   2單位頻振 ） 。

3.吸出鋼珠，補(bǔ)0.12mlTrizol。

4.余下步驟即正常的RNA提取步驟。